Teknologi PCR adalah serupa dengan proses replikasi semula jadi DNA, dan kekhususannya bergantung pada primer oligonukleotida yang saling melengkapi kedua-dua hujung urutan sasaran. PCR terdiri daripada tiga langkah tindak balas asas: denaturasi, penyepuhlindapan, dan sambungan. Proses tindak balas ini dijalankan dalam bekas tindak balas PCR. Dengan perkembangan berterusan instrumen penguatan gen, bekas tindak balas juga telah mengalami perkembangan tiub sentrifuge secara beransur-ansur dari 1.5ml hingga 0.2ml (0.25ml) ke 0.2ml berdinding nipis yang dikhaskan untuk PCR. , tiub 0.1mlpcr. Dengan peningkatan bilangan tindak balas penguatan PCR, bekas penguatan gen tinggi untuk jalur PCR dan plat PCR terbentuk secara beransur-ansur.
PCR terdiri daripada tiga langkah tindak balas asas: denaturation-annealing-extension
Denaturasi DNA templat:
Selepas DNA templat dipanaskan kepada kira-kira 94°C untuk tempoh masa tertentu, DNA dua terdampar DNA templat atau DNA dua terdampar yang dibentuk oleh penguatan PCR dipisahkan, supaya ia boleh digabungkan dengan primer untuk mempersiapkan pusingan seterusnya tindak balas.
Annealing (pematangan semula) DNA templat dengan primer:
Selepas DNA templat denatured ke dalam satu helai dengan pemanasan, dan suhu diturunkan kepada kira-kira 55°C, primer dipasangkan dengan urutan pelengkap helai tunggal DNA templat.
Pelanjutan primer:
Di bawah tindakan Taq, konjugasi templat-primer DNA menggunakan dNTP sebagai bahan mentah tindak balas untuk mensintesis rantaian replikasi separa simpanan baru yang melengkapi rantaian DNA templat mengikut prinsip pasangan asas dan replikasi separa terpelihara.
Prinsip Asas Teknologi PCR
Teknologi ini bergantung pada reaksi sintesis enzimatik polimerase DNA dengan kehadiran DNA templat, primer dan empat deoksiribonukleotida.
DNA polimerase menggunakan DNA tunggal terdampar sebagai templat untuk memulai sintesis dengan sepotong kecil DNA terdampar ganda. Satu atau dua primer oligonukleotida sintetik digabungkan dengan urutan pelengkap dalam templat DNA tunggal yang terdampar untuk membentuk DNA dua helai separa.
Di bawah suhu dan persekitaran yang sesuai, polimerase DNA menambah deoksirionukleotida ke hujung 3'-OH primer, dan menggunakan ini sebagai titik permulaan untuk memanjangkan sepanjang arah 5'→3' templat untuk mensintesis helai pelengkap DNA baru .
Perbezaan antara tiub PCR dan tiub sentrifuge
Tiub PCR:
Plat tindak balas PCR adalah 96-baik atau 384-baik, yang direka khas untuk tindak balas batch. Prinsipnya ialah daya tampung mesin PCR dan urutan biasanya 96 atau 384.
Tiub Centrifuge:
Tiub sentrifuge tidak semestinya tiub PCR. Terdapat banyak jenis tiub sentrifuge mengikut kapasiti mereka. Yang biasa digunakan ialah 1.5ml, 2ml, 5ml, 15 atau 50ml, dan yang terkecil (250ul) boleh digunakan sebagai tiub PCR.
Cara memilih tiub PCR
Kami memilih untuk meletakkan tiub PCR dengan harapan memilih lokasi yang paling tepat untuk suhu.
Kedudukan suhu yang paling tepat mestilah kedudukan di atas sensor suhu di bawah modul (tanpa mengira suhu sensor yang tidak tepat).
Kedudukan sensor suhu instrumen PCR yang berbeza adalah berbeza.
Sebagai contoh, AB's 2720 hanya mempunyai satu di tengah, MJ 200 mempunyai tiga sensor, iaitu kiri bawah, tengah dan kanan atas, Eppendorf harus berada di baris A atau H, dan Dongshenglong 811 mempunyai tiga sensor suhu, B1-2 harus dipilih , C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, kerana titik ini adalah titik ketepatan masa suhu.
