Bagi penyakit yang disebabkan oleh jangkitan virus, untuk menjelaskan jenis virus yang perlu dirawat, dua jenis pemeriksaan berikut boleh dilakukan:
1. Pengesanan langsung virus itu sendiri
2. Ia boleh mengesan antigen pada permukaan virus dan asid nukleik virus.
Ujian mengenal pasti antibodi yang dihasilkan untuk menentang virus:
Dalam keadaan biasa, ujian antigen tidak memerlukan keadaan makmal yang tinggi, dan terutamanya sesuai untuk pemeriksaan berskala besar di hospital primer; ujian antibodi mudah dikendalikan, dan keputusan ujian boleh diperolehi dalam 10-15 minit. Pengesanan asid nukleik memerlukan banyak keadaan makmal, kakitangan terputus-putus, dan peralatan, tetapi halaman keputusan adalah yang paling sensitif dan tepat.
Daripada 10 reagen pengesanan asid nukleik coronavirus baharu yang telah diluluskan, 8 daripadanya semuanya menggunakan kaedah PCR pendarfluor, dan kaedah pengesanan yang selebihnya ialah kaedah penjujukan pempolimeran berlabuh probe gabungan dan kaedah cip penguatan suhu malar.
1. Kaedah PCR pendarfluor
Kaedah PCR merujuk kepada tindak balas rantai polimerase, yang boleh meningkatkan jumlah surih DNA. Apabila digunakan untuk mengesan coronavirus baharu, kerana coronavirus baharu ialah virus RNA, adalah perlu untuk membalikkan transkripsi RNA virus ke dalam DNA sebelum melakukan pengesanan PCR.
Prinsip pengesanan PCR pendarfluor ialah apabila PCR berjalan, produk tindak balas terus terkumpul, dan keamatan isyarat pendarfluor juga meningkat mengikut perkadaran. Akhirnya, perubahan dalam jumlah produk dipantau oleh perubahan dalam keamatan pendarfluor, dengan itu memperoleh keluk penguatan pendarfluor.
Ini adalah kaedah yang paling biasa digunakan untuk pengesanan asid nukleik coronavirus baharu pada masa ini. Walau bagaimanapun, faktor berikut boleh menyebabkan ralat dalam keputusan ujian:
Penyimpanan yang tidak betul atau kegagalan untuk diserahkan untuk ujian: Virus RNA mudah terdegradasi. Oleh itu, selepas mendapatkan sampel pesakit, ia perlu disimpan secara piawai dan diuji secepat mungkin. Jika tidak, keputusan ujian mungkin tidak tepat.
Tafsiran ralat keputusan: Produk ujian yang diluluskan pada masa ini dipilih berdasarkan bingkai bacaan terbuka 1a/b, protein sampul surat dan protein nukleokapsid bagi genom coronavirus novel. Walau bagaimanapun, primer pengesanan dan reka bentuk probe produk berbeza adalah berbeza, dan terdapat perbezaan dalam pengesanan dan tafsiran segmen sasaran tunggal, segmen dwi sasaran dan segmen tiga sasaran. Oleh itu, jika tafsiran tidak dijalankan dengan ketat mengikut arahan yang berbeza, ia mungkin membawa kepada keputusan yang salah.
2. Kaedah penjujukan pempolimeran berlabuh probe gabungan
Pengesanan ini terutamanya menggunakan instrumen khas untuk mengesan jujukan gen yang dibawa oleh nanosfera DNA pada slaid penjujukan.
Pengesanan jenis ini mempunyai sensitiviti yang tinggi dan tidak mudah terlepas diagnosis, tetapi hasilnya juga mudah dipengaruhi oleh banyak faktor, termasuk:
Sampel tidak diuji dalam masa: Seperti kaedah PCR pendarfluor, keputusan mungkin tidak tepat jika ia tidak disimpan dalam cara yang standard dan diuji secepat mungkin.
Suhu bilik tapak ujian terlalu tinggi: Ini juga akan menjejaskan ketepatan keputusan ujian. Instrumen dan kit ujian yang berbeza juga boleh menjejaskan keputusan.
3. Kaedah cip penguatan suhu malar
Pengesanan cip gen adalah salah satu kaedah diagnostik virologi tradisional. Prinsip pengesanan ialah kaedah pengesanan yang dibangunkan berdasarkan ciri pengikatan pelengkap asid nukleik, yang boleh digunakan untuk mengukur secara kualitatif atau kuantitatif asid nukleik yang terdapat dalam organisma. Berbanding dengan PCR, cip gen mempunyai kadar ketepatan yang lebih tinggi dan masa yang lebih singkat, tetapi ia juga lebih mahal dan daya pengesanan (jumlah data yang boleh dijana setiap unit masa) secara relatifnya lebih rendah.
Cip termostat yang diluluskan kali ini boleh mengesan enam jenis virus pernafasan, termasuk coronavirus baharu. Keputusan boleh diperolehi dalam masa 1.5 jam,
Berbanding dengan PCR, cip gen mempunyai kadar ketepatan yang lebih tinggi dan masa yang lebih singkat, tetapi harganya lebih mahal, dan daya pengesanan (jumlah data yang boleh dijana setiap unit masa) secara relatifnya lebih rendah.
4. Pengesanan antibodi virus
Reagen pengesanan antibodi digunakan untuk mengesan antibodi IgM atau IgG yang dihasilkan oleh tubuh manusia selepas virus memasuki tubuh manusia. Antibodi IgM muncul lebih awal dan antibodi IgG muncul kemudian.
Pada masa ini, lima reagen pengesanan antibodi coronavirus baharu yang telah diluluskan menggunakan kaedah emas koloid dan kaedah chemiluminescence zarah magnetik.
5. Kaedah emas koloid
Kaedah emas koloid menggunakan kertas ujian emas koloid untuk ujian, yang merupakan kertas ujian cepat yang sering dirujuk pada masa ini.
Kertas ujian jenis ini ditanda khas dan mempunyai lubang di atasnya, yang digunakan untuk menitiskan sampel serum pemeriksa. Terdapat dua garisan pada kertas ujian emas koloid, satu dipanggil garis ujian dan satu lagi dipanggil garis kawalan kualiti. Jika kedua-dua garisan berwarna, ia bermakna positif; hanya garis kawalan kualiti berwarna, yang bermaksud negatif; kecuali untuk dua kes ini, ia tergolong dalam keputusan tidak sah.
