Untuk piring petri bawah kaca yang biasa di pasaran, lubang biasanya dibuat di bahagian bawah piring petri plastik, dan kemudian kaca penutup atau slaid sel dengan ketebalan 170-220 μm dilekatkan pada bahagian bawah cawan petri. piring petri dengan gam tanpa bayangan atau gel silika. Bukan keseluruhan bahagian bawah piring petri diperbuat daripada kaca. Kawasan yang sesuai untuk pemerhatian hanyalah di kawasan tebuk. Walau bagaimanapun, disebabkan oleh hidrofobisiti kaca, apabila mengkultur sel, sel tidak dapat melekat dengan baik pada kaca, dan keadaan pertumbuhan tidak baik, malah fenomena delaminasi sel berlaku semasa pengimejan pengimbasan confocal.
Untuk membolehkan sel melekat dengan baik, adalah perlu untuk mengesahkan bahawa reagen protein tertentu telah disalut sebelum menggunakan hidangan bawah kaca untuk kultur sel.
selimut buat sendiri
Kultur sel yang berbeza memerlukan reagen salutan yang berbeza. Pada masa yang sama, kerana protein yang digunakan untuk salutan adalah produk biologi, ketulenan produk dan dos protein salutan syarikat yang berbeza adalah berbeza. Catatan teknikal ini hanya untuk rujukan. Dos khusus reagen salutan hendaklah merujuk kepada arahan jenama yang digunakan. . Dan yang terbaik adalah melakukan eksperimen kecerunan dengan reagen yang anda gunakan untuk mencari kepekatan salutan yang paling sesuai.
Berikut ialah contoh Poly-L-Lysine (PLL, sigma, P4832, 100ug/ml):
Salutan PLL sesuai untuk sebahagian besar sel, terutamanya untuk kultur neuron dalam sistem pusat. Ia perlu membuat kandungan protein (ug/cm2) bagi setiap unit luas untuk mencapai jumlah yang dikehendaki semasa penggunaan. Jumlah salutan yang disyorkan untuk PLL dalam contoh ini ialah 2 ug/cm2. Ia adalah perlu untuk mengira jumlah protein yang diperlukan mengikut kawasan salutan dan jumlah salutan.
Sebagai contoh: piring petri bawah kaca 35mm, kawasan pertumbuhan sel ialah 3.5cm2, kawasan salutan ialah 4.1cm2, dan isipadu larutan salutan ialah 400ul, maka dos yang disyorkan ialah 2ug/cm2. Kemudian 8.2 ug PLL diperlukan dalam satu telaga. Jika hanya 400 ul larutan PLL ditambah, kepekatan larutan PLL ialah 20.5 ug/ml (kira-kira 20 ug/ml). Oleh itu, larutan stok perlu dicairkan dengan air ultratulen.
Langkah-langkah khusus:
1. Cairkan larutan stok PLL 1:5 dengan air ultratulen.
2. Tambah 400 ul pencairan PLL pada setiap cawan petri bawah kaca 35 mm.
3. Inkubasi selama 1-2 jam pada suhu bilik dan aspirasikan pencairan PLL.
4. Basuh dengan berhati-hati 3 kali dengan 2ml larutan PBS atau medium bebas serum, dan sedut larutan pencuci.
5. Terus tambah penggantungan sel untuk penanaman.
Penilaian kaedah
Disebabkan oleh sifat berbeza dari pelbagai protein salutan, protein salutan yang berbeza digunakan dengan cara yang berbeza. Pencemaran baru sering dibuat kerana keperluan untuk menyalut pinggan kaca. Selain itu, pencemaran sering ditemui selepas sel telah dinaikkan, yang bukan sahaja melambatkan masa, tetapi juga membazirkan bahan habis pakai kit. Lagipun, reagen protein bersalut dan pinggan mangkuk bawah kaca yang terjamin kualitinya adalah mahal (hidangan bawah kaca yang tidak berkualiti mungkin bocor kerana gam tidak melekit atau gam yang digunakan adalah toksik kepada sel).
Piring Petri Confocal tanpa salutan
Bagi kanak-kanak yang ingin menjimatkan masa dan usaha, lebih senang menggunakan hidangan budaya confocal tanpa salutan.
Faktor yang perlu dipertimbangkan semasa memilih hidangan kultur yang sesuai ialah: sama ada ia sesuai untuk dipatuhi oleh sel anda sendiri, sama ada ciri optik hidangan kultur memenuhi keperluan confocal.
Piring petri yang memenuhi keperluan faktor di atas tidak terhad kepada piring bawah kaca bersalut. Malah, semua orang tahu bahawa hidangan plastik lebih murah dan mudah untuk melekat pada sel berbanding kaca. Berikut ialah contoh hidangan budaya confocal dari Shanghai Jingan, untuk bercakap tentang parameter yang perlu ada pada hidangan budaya yang sesuai untuk eksperimen confocal:
Ia boleh dilihat bahawa parameter fizikal hidangan budaya confocal yang memenuhi keperluan penggunaan langsung adalah sangat dekat dengan kaca, tetapi pada masa yang sama, mereka juga mempunyai sifat hidrofilik, yang boleh membuat kebanyakan sel mematuhi lebih baik; dan kemuluran lebih baik daripada kaca. Ia membolehkan kebanyakan garisan sel dan sel primer melekat terus pada dinding, dan tidak rapuh, yang merupakan pilihan yang baik.
Anda juga boleh mencari hidangan budaya confocal yang paling sesuai untuk percubaan anda mengikut keperluan percubaan khusus anda dan parameter dalam jadual di atas.
Penilaian kaedah
Memilih hidangan petri jenis ini tidak memerlukan salutan tambahan, sangat mengurangkan risiko pencemaran. Dan oleh kerana bahagian bawah plastik lebih mudah untuk digunakan, tiada gam diperlukan untuk memasangnya ke bahagian bawah piring petri. Hilangkan kemungkinan kebocoran atau sitotoksisiti.
