1. Pemulihan
●1. Keluarkan cryovial daripada nitrogen cecair, segera masukkan ke dalam tab mandi air 37 darjah, dan goncangkannya sedikit. Selepas cecair telah cair (kira-kira 1-1.5 minit), keluarkan dan semburkan sedikit alkohol dan letakkan di atas meja kerja yang sangat bersih.
●2. Aspirasikan ampaian sel di atas ke dalam tiub emparan 15ml yang diisi dengan medium 10ml (basuh tiub cryopreservation dengan medium untuk membasuh semua sel yang melekat pada dinding), dan sentrifuge pada 1000 rpm selama 5 minit.
●3. Tuangkan supernatan dan tambah 1ml medium untuk menggantung sel. Disedut ke dalam cawan petri 10cm yang mengandungi 10ml medium kultur dan digoncang perlahan-lahan ke depan dan ke belakang untuk menjadikan sel-sel dalam piring petri teragih sama rata.
●4. Labelkan jenis dan tarikh sel, nama penanam, dsb., dan letakkan dalam inkubator CO2 untuk penanaman. Selepas sel melekat pada dinding, tukar medium.
●5. Tukar medium setiap 3 hari.
2. Laluan
●1. Laluan apabila liputan sel dalam hidangan kultur mencapai 80 peratus -90 peratus .
●2. Aspirasikan medium asal.
●3. Tambah trypsin yang sesuai (cukup untuk menutup sel) dan hadam selama 1-2 minit.
●4. Selepas sel dibulatkan, tambahkan jumlah medium yang mengandungi serum yang sama untuk menamatkan penghadaman.
●5. Gunakan pipet untuk menggantung sel dengan pipet.
●6. Aspirasikan sel ke dalam tiub emparan 15ml dan sentrifuge pada 1000 rpm selama 5 minit.
●7. Tuangkan supernatan, tambah 1-2ml medium dan letupkan sel.
●8. Pindahkan sel ke beberapa hidangan bergantung pada jenis sel. Secara amnya, terdapat 5 sel kanser dan 3 sel normal. Teruskan bercucuk tanam.
3. Cryopreservation Mencerna sel dan emparan (ibid.). Gantungkan sel dengan larutan pembekuan yang disediakan, dan edarkannya ke dalam kriovial yang disterilkan, biarkan ia berdiri selama beberapa minit, dan nyatakan jenis sel dan tarikh pengawetan krio. 4 darjah selama 30 minit, -20 darjah selama 30 minit, -80 darjah semalaman, dan kemudian diletakkan dalam nitrogen cecair untuk penyimpanan. Penyediaan penyelesaian cryopreservation: 70 peratus sederhana lengkap ditambah 20 peratus FBS ditambah 10 peratus DMSO. DMSO perlu ditambah perlahan-lahan, goncang sambil menitis.
