Medium kultur sel ialah asas nutrien untuk meniru secara buatan persekitaran pertumbuhan in vivo sel haiwan dan mengekalkan kemandirian dan percambahan sel secara in vitro. satu nutrien. Jadi apakah masalah biasa yang dihadapi dalam penggunaan medium kultur sel? Jom buat analisis.
1. Pemilihan sistem penampan dan perubahan pH medium kultur sel
Memandangkan pH optimum untuk kebanyakan sel adalah antara 7.0 dan 7.4, sisihan daripada julat ini mungkin mempunyai kesan yang merosakkan pada pertumbuhan sel. Walau bagaimanapun, keperluan pH pelbagai sel tidak sama. Sel kultur primer umumnya mempunyai toleransi yang lemah terhadap turun naik pH, manakala garisan sel yang tidak terhingga mempunyai toleransi yang kuat. Oleh itu, dalam budaya primer, sistem penimbal dalam medium budaya adalah lebih penting. Medium kultur sel am menggunakan sistem garam seimbang, tetapi media kultur yang berbeza atau siri media kultur yang sama menggunakan sistem garam seimbang yang berbeza. Contohnya, siri 199 dan siri MEM semuanya mempunyai medium budaya sistem Hanks dan budaya sistem Earle. asas. Sesetengah media bukan sistem garam seimbang konvensional yang disebutkan di atas, seperti medium RPMI1640, medium F12. Sistem garam seimbang bagi medium serum rendah MEM juga bukan sistem garam seimbang konvensional, dan kapasiti penimbalan sistem garam seimbang adalah lebih kuat daripada sistem garam seimbang konvensional.
kultur sel
Terdapat banyak sebab penurunan pH semasa kultur sel. Apabila sel berkembang sangat cepat, nilai pH biasanya menurun dengan cepat, yang boleh diselesaikan dengan laluan tepat pada masanya, meningkatkan nisbah laluan, atau mengurangkan jumlah serum. Di samping itu, terlalu ketat penutup botol kultur, kapasiti penimbalan sistem penimbal NaHCO3 yang tidak mencukupi, kepekatan garam yang tidak betul dalam medium kultur, pencemaran bakteria, yis atau kulat juga boleh menyebabkan pH sering turun dengan cepat. Pada masa ini, anda boleh menyelesaikannya dengan cara berikut:
1) Meningkatkan kepekatan NaHCO3 dalam medium kultur atau mengurangkan kepekatan CO2 dalam inkubator. Apabila kandungan NaHCO3 adalah antara 2.0 g/L dan 3.7 g/L, kepekatan CO2 yang sepadan ialah 5~10 peratus ;
2) Tukar kepada medium kultur bebas CO2-;
3) Longgarkan penutup botol dengan betul. Tambahkan penimbal HEPES pada medium kultur untuk menjadikan kepekatan akhir 10-25 mM;
4) Gunakan larutan kultur berdasarkan garam Earle dalam persekitaran kultur CO2, dan gunakan larutan kultur yang disediakan oleh garam Hanks dalam persekitaran kultur atmosfera;
5) Buang kultur atau sterilkan dengan antibiotik jika pencemaran menjadi punca.
2. Beberapa bahan tambahan penting biasanya digunakan dalam media kultur sel dan masalah yang perlu diberi perhatian dalam proses penggunaan
Fenol merah digunakan sebagai penunjuk pH dalam media kultur sel. Secara umum, nilai pH medium boleh dinilai dengan kesan penunjuk fenol merah, tetapi kandungan fenol merah dalam serum rendah atau medium kultur sel bebas serum adalah berbeza daripada medium kultur sel biasa, dan tidak boleh diperhatikan. dengan mata kasar atau Nilai pH ditentukan secara empirik, dan disyorkan untuk menggunakan meter pH untuk pengukuran. Fenol merah biasanya tidak mempunyai kesan ketara ke atas kualiti produk biologi yang dihasilkan dalam media kultur sel yang mengandungi serum, dan juga boleh dikeluarkan dengan teknik penulenan, tetapi fenol merah boleh menyebabkan ketidakseimbangan natrium/kalium intrasel dalam media kultur sel bebas serum. , menjejaskan pertumbuhan sel.
plat kultur sel
Natrium bikarbonat digunakan terutamanya sebagai sistem penampan dalam medium kultur sel, dan juga mempunyai kesan mengawal tekanan osmotik. Biasanya jumlah natrium bikarbonat yang disyorkan dalam arahan penggunaan produk adalah jumlah standard dan selamat, yang diperoleh berdasarkan pengalaman praktikal secara saintifik. Walau bagaimanapun, disebabkan oleh garisan sel yang berbeza (tekanan), sel yang sama mungkin menyesuaikan diri dengan persekitaran yang berbeza (toleransi sel yang berbeza, dsb.), dan terdapat perbezaan serantau dalam kualiti air, dsb., yang juga boleh diubah sedikit dalam pengeluaran sebenar proses, tetapi penggunaan Mereka yang perlu melakukan ujian yang sepadan (ujian pengeluaran fizikokimia dan sel, dll.).
HEPES ialah penimbal bukan ionik dengan kapasiti penimbalan yang baik dalam julat pH 7.2 hingga 7.4, dan mungkin toksik kepada sesetengah sel pada kepekatan tinggi. Penampan HEPES boleh digunakan dengan paras rendah natrium karbonat (0.34g/L) untuk mengimbangi peningkatan tekanan osmotik yang disebabkan oleh penambahan HEPES tambahan. Julat kepekatan selamatnya ialah 10 ~ 25mmol/L.
Natrium piruvat boleh digunakan sebagai sumber karbon alternatif dalam kultur sel, dan walaupun sel lebih suka glukosa sebagai sumber karbon, sel juga boleh memetabolismekan natrium piruvat tanpa kehadiran glukosa.
Glutamin sangat tidak stabil dalam larutan. Ia boleh diuraikan kepada 50 peratus pada 4 darjah selama 1 minggu. Adalah lebih baik untuk menyediakannya secara berasingan untuk digunakan, simpan dalam peti sejuk -20 darjah dan tambahkannya pada medium kultur sel sebelum digunakan.
